Состав крови образован плазмой и форменными компонентами, большую часть из которых составляют эритроциты. Зрелые кровяные клетки не содержат ядра и имеют двояковогнутую форму. Главная их функция – транспортировка газов в тканях органов. Уровень эритроцитарных клеток в крови человека зависим от таких факторов, как пол и возраст, но является величиной достаточно постоянной, поэтому колебание их количества дает ценную информацию в процессе диагностирования.
Для вычисления количества кровяных клеток чаще всего используется унифицированный метод подсчета эритроцитов с использованием оборудования, известного, как камера Горяева, либо с помощью электронных счетчиков автоматического типа. Оба способа на данный момент широко используются и в ежедневной лабораторной практике, и при научных изысканиях, так как погрешность результатов, полученных в ходе их применения, минимальна.
Что такое камера Горяева, ее технические характеристики
Камера Горяева
Камера Горяева представляет из себя простое устройство для визуального подсчета форменных элементов крови под микроскопическим увеличением. Оно сконструировано на основе предметного стекла, имеющего специальные углубления для номинального объема крови, а также покровного стекла с нанесенной сеткой.
Различают несколько конструкций камеры Горяева в зависимости от количества камер (углублений для заполнения кровью), чаще всего в лабораториях применяются двухкамерные или четырехкамерные модели. Над каждой из камер находится специальная счетная сетка, нанесенная на покровное стекло методом лазерной гравировки либо при помощи микронапыления краски.
Приспособление сконструировано таким образом, что все имеющиеся камеры имеют равный объем, который указан в технической документации модели, их глубина и размеры секторов покровной сетки также стандартны. Это делает возможным переводить после подсчета форменных элементов их суммарные значения в единицы концентрации заданных клеток в объеме крови.
Камера Горяева и её характеристики
Устройство представлено толстым стеклом, внутри которого имеется углубление. На нем нанесена сетка, видимая только под микроскопом, по которой врач-лаборант подсчитывает клетки. Сверху камеры помещаются предметные стекла таким образом, чтобы исследуемый материал сдавливался с двух сторон.
Камера Горяева производится в 2 вариантах:
- двухсеточная (состоит из 2 камер);
- четырехсеточная (состоит из 4 камер).
Цена приспособления зависит от его качества. Производитель должен отшлифовать стекло, правильно нанести сетку с помощью лазера или вакуумного напыления.
Сетка Горяева состоит из 225 квадратов. Они бывают большими и малыми. Врач перемещает микроскоп над ними слева направо, вниз, затем справа налево, пока все поля не закончатся.
Обслуживание камеры Горяева
Чтобы приспособление показывало верные результаты, за ним необходимо ухаживать. Камеру необходимо тщательно протирать перед применением. Для этого используют бинт, который смачивают в спирте. Стерилизующая жидкость должна быть качественная, чтобы на поверхности стекла не осталось осадка. Стекло готово к работе, если на нем появились радужные кольца на обеих поверхностях.
Важно! Нельзя использовать для протирания камеры вату, так как она содержит волокна, которые могут остаться на поверхности стекла, что затруднит исследование.
Камера Горяева идёт в стандартной комплектации, с покровными стеклами. Если они отсутствуют или сломались, возможно использование обычных стекол, соответствующих по размеру.
Во время работы с камерой и предметными стеклами врач-лаборант должен надевать перчатки. Это предотвращает попадание отпечатков пальцев, которые будут мешать в работе с микроскопом.
После завершения работы камера должна быть продезинфицирована. Для этого ее погружают целиком в раствор этилового спирта. Время дезинфекции составляет 30 минут. Если используется другой стерилизатор, время удлиняется до 1 часа. После завершения данного этапа устройство обрабатывают водой и протирают насухо.
Описание сетки камеры Горяева
Сетка в камере Горяева
Покровное стекло имеет гравировку в виде сетки, большие квадраты которой имеют величину стороны в 1 мм. Чаще всего таких квадратов 9 над каждой счетной камерой, они расположены так, что образуют три столбца по три квадрата в каждом. Те большие квадраты, что располагаются по периферии, разделены на 16 квадратов поменьше, длина и ширина которых равны 0,2 мм. Стандартная глубина камеры под этими квадратами позволяет легко подсчитывать количество клеток в единицах объема, он равен для них 0,1 мм3 или 10-4 мл.
Большой квадрат, расположенный посередине, имеет дополнительные разделяющие линии, они нанесены так, что делят каждый из 16 средних квадратов еще на 16 самых маленьких. Их сторона равна 0,05 мм.
Строение камеры
Камера Горяева представляет собой не что инное, как предметное стекло (но намного толще обычного), разделенное поперечными бороздами на три части. Средняя часть стекла содержит специальную сетку для подсчета. Крайние же части камеры служат для притирания покровного стекла — таким образом, по центру создается закрытая камера с капиллярными пространствами по бокам, через которые она и заполняется жидкостью.
Что же касается сетки, то камера Горяева разделена на 225 больших квадратов равных размеров — расположены они в пятнадцать рядов. 25 больших квадратов дополнительно разделены на меньшие, по 16 в каждом. Длина каждой стороны этого маленького квадратика составляет 0,05 мм.
Правило Егорова для подсчета форменных элементов
Правильный подсчет клеток в сетке
Подсчет форменных элементов крови ведется под микроскопом с применением соответствующего увеличения, чаще всего используется окуляр х10. Подсчитывают число клеток в тех больших квадратах, что разделены на 16 средних, начинают считать от верхнего левого и двигаются вниз направо, захватывая при подсчете 5 больших квадратов.
Для того, чтобы верно определить количество клеток в заданном объеме крови, необходимо исключить повторный подсчет тех форменных элементов, что располагаются на границах или узлах сетки. Такая ошибка привела бы к увеличению подсчитываемого показателя, для ее устранения было сформулировано правило Егорова. Оно гласит, что к данному квадрату относятся те элементы, что лежат в его пределах, не касаясь нанесенных линий, а также те клетки, что располагаются на верхней и левой сторонах квадрата. Те клетки, что «касаются» нижней или правой стороны, при подсчете учитываться не должны.
Подсчет лейкоцитов в камере Горяева — устройство камеры и принцип подсчета показателей
Камера Горяева – это приспособление для измерения числа клеток и частиц в определённом объёме жидкости (кровь, моча), состоящее из специального толстого предметного и покровного стёкла.
Предметное стекло имеет углубленную площадку посередине, на которую нанесена сетка из 225 больших квадратов. Из этих квадратов 25 равномерно разделены на 16 меньших квадратов. Благодаря такому объёму сетки подсчёт выполняется точнее, нежели в других ручных счётных устройствах.
Обслуживание камеры
После использования инструмента предметное стекло дезинфицируют путём погружения в 4% раствор формалина на час или в 70% раствор этилового спирта на полчаса.
После этого камеру тщательно промывают дистиллированной водой. Излишек жидкости убирают мягкой салфеткой.
Стоит обратить внимание на то, что камеру нельзя протирать ватным тампоном из-за цепляющихся к ней волокон. Хранится стекло в сухом месте.
Правило Егорова
Во время использования камеры в подсчитываются те ФЭ, которые располагаются внутри квадрата сетки и на верхней и левой линии его периметра. При этом частицы, касающиеся правой и нижней линии периметра во время расчёта данной клетки не включаются.
Методика подсчёта лейкоцитов
Подсчёт количества лейкоцитов начинается с разведения крови в 3-5% растворе этановой кислоты с метиловой синью в 20 раз. Рабочий материал перед применением протирают марлей насухо.
Покровное стекло нужно протереть до возникновения цветных колец Ньютона. Далее, камеру заполняют разведённой кровью, при этом первые две капли выпускают на фильтровальную бумагу.
Жидкость попадает в камеру благодаря капиллярному свойству воды. Важно проследить, чтобы в желобки при заполнении ничего не затекало. Если это произошло, жидкость аккуратно убирают фильтровальной бумагой.
Затем оставляют сетку в покое на минуту, ожидая, пока ФЭ остановят своё движение.
Подсчёт лейкоцитов осуществляется в пределах ста больших квадратов при малом увеличении, то есть при окуляре 10х и объективе 8х, по правилу Егорова. Полученная цифра используется в формуле.
Х = (n× 250 × 20) / 100 или Х = n × 50
Х – количество лейкоцитов.
n – число, полученное в результате подсчёта в камере.
Количество лейкоцитов определяют, принимая во внимание число больших квадратов сетки – 100 и разведение крови – 20.
Норма лейкоцитов и отклонения
Норма лейкоцитов у людей составляет 4,0 – 9,0 × 10⁹/л. Или, по-другому, в 1 кубическом мм крови располагается примерно 6000 белых кровяных клеток.
На отклонения от нормы могут влиять внешние физиологические факторы:
- приём пищи перед сдачей крови,
- стресс,
- беременность или менструация у женщин,
- переохлаждение или перегрев,
- большая физическая нагрузка перед сдачей анализов.
Если количество белых кровяных клеток превышает 9,0 × 10⁹/л (повышены лейкоциты), такое состояние называется лейкоцитозом. Подобную картину можно увидеть при злокачественных заболеваниях крови, инфекциях, поражениях радиацией и отравлениях.
Лекарственные препараты тоже способны увеличить количество лейкоцитов. Некроз тканей, обильные кровотечения, в том числе в результате операций, почечная кома, болезни сердца – всё это может привести лейкоцитозу.
Падение количества лейкоцитов ниже 3,9 × 10⁹/л называется лейкопенией. Однако у некоторых людей фиксируется постоянное число лейкоцитов в количестве 3,5 × 10⁹/л.
Принято считать, что у таких людей сохраняется резерв этих клеток в тканях в 50 раз больше, нежели в крови.
Еще встречается функциональная лейкопения после введения анальгетиков, сульфаниламидов и других лекарственных препаратов, после долгой мышечной работы, в результате поражения инфекциями и вирусами (тиф, грипп, корь).
Лейкоцитарная формула
Все виды лейкоцитов составляют лейкоцитарную формулу. По ней можно выявить определённые патологии. Нормы формулы меняются в зависимости от возраста и периода жизни человека. Сдвиг хорошо заметен у женщин во время беременности или после родов.
Применяются разные способы подсчёта соотношения видов этих клеток, но все они связаны с тем, что более тяжелые клетки (базофилы, например) располагаются ближе к краю мазка, а лимфоциты, как легкие клетки, остаются в середине.
- Метод Филипченко. В данном способе подсчёт осуществляется по поперечной прямой границы одного конца к другому. Мазок при этом мысленно разделяют на три части.
- Метод Шиллинга. Лейкоциты подсчитывают в четырех участках мазка.
Полученные данные записываются в таблицу. Индивидуально количество каждого вида белых клеток крови высчитывается по формулам. Отмечаются те элементы, которые попали в поле зрения. Счёт ведётся до того, момента, пока сумма всех подсчитанных клеток не составит 100.
Методика подсчёта лейкоцитов в моче
В моче подсчитывается количество лейкоцитов в камере Горяева по Нечипоренко. Этот анализ нужен для мониторинга заболеваний почек. Периодическое исследование мочи помогает проследить за правильностью лечения и эффективностью назначенной терапии.
Сбор мочи
В изучение идёт только первая утренняя моча в середине мочеиспускания. Для пациента важно следовать основным правилам сбора этого биоматериала. Специальной дополнительной подготовки для исследования не требуется.
Методика расчета
10 мл свежесобранной мочи центрифугируют в течение трёх минут при 2,5 тыс. оборотов в минуту. Перед этим необходимо проследить, чтобы моча, во избежание частичного распада клеток, имела слабокислую реакцию.
При помощи пипетки с узким оттянутым концом убирают верхний слой. В пробирке оставляют от 0,5 мл мочи до 1 мл в зависимости от объёма осадка.
Осадок аккуратно перемешивают с надосадочной жидкостью. Полученным раствором заполняют счётную камеру Горяева по схожему принципу, что используется при подсчёте ФЭ крови. Камеру оставляют в покое от 3 до 5 минут.
Лейкоциты необходимо подсчитать в больших квадратах по всей сетке с окуляром 7х и объективом 40х.
Полученная цифра используется в формуле:
Х = (а/0,9) × (1000/V)
Х – число лейкоцитов в 1 мл мочи.
а – подсчитанное количество, делённое на объём камеры в 1 мкл осадка мочи.
v – Количество мочи, взятой для исследования.
1000 – количество осадка.
Это важно! Норма лейкоцитов: в 1 мл мочи не более 2 × 10³ белых кровяных клеток.
Загрузка…
Источник: https://dlja-pohudenija.ru/serdcze/metodika-podscheta-lejkoczitov-v-kamere-goryaeva-normy-pokazatelej-i-otkloneniya
Методика подсчета лейкоцитов
При ошибке анализатора помогает камера Горяева
Для подсчета лейкоцитов в крови в современных клинических лабораториях чаще всего используются специальные автоматические анализаторы, методика подсчета при помощи камеры Горяева относится к редко применяемым из-за своей трудоемкости и низкой скорости анализа. Для того, чтобы верно определить концентрацию отдельных видов лейкоцитов, требуется врач лабораторной диагностики или фельдшер-лаборант, владеющий навыками работы с микроскопом.
Подсчет при помощи камеры Горяева оправдан в тех случаях, когда автоматический анализатор не способен верно идентифицировать клетки крови пациента. Это случается при онкологических заболеваниях системы крови и некоторых других болезнях, при которых клетки имеют нетипичный вид и объем. К плюсам визуального подсчета относится возможность углубленной диагностики благодаря тому, что опытный врач способен отличить измененные клетки, характерные для отдельных патологий, и отразить их наличие в результатах анализа.
Лейкоциты должны быть подготовленными перед работой
Для подсчета отдельных видов лейкоцитов кровь разводят в несколько раз слабым раствором уксусной кислоты, при этом образцы без лейкоцитоза, как правило, следует разводить не менее чем в 20 раз, в случаях выраженного увеличения количества белых кровяных телец может потребоваться большее разведение. Для контрастирования изображения применяют окрашивание метиленовой синью.
После заполнения камер исследуемым объемом крови сверху накладывается покровное стекло сеткой и производится ее притирка, в ходе которой должны полностью исчезнуть пузыри воздуха между двумя стеклами. Заполненная камера помещается под микроскоп, причем целесообразно оставить ее неподвижной на 1-2 минуты для того, чтобы форменные элементы полностью прекратили движение и осели.
После этого на среднем увеличении (окуляр не менее чем х10) проводится подсчет отдельных видов лейкоцитов в не менее чем 100 квадратах. Для перевода получившегося числа в объемные значения необходимо умножить его на разведение (как правило, в 20 раз) и на количество квадратов, участвовавших в подсчете (чаще всего 100). Полученное число дает представление о количестве лейкоцитов в 1 мкл крови.
Разбавление крови с целью исследования
Определение количества эритроцитов состоит из нескольких последовательных действий. Первым этапом становится разведение определенного объёма крови в реагенте. Делается это в связи с огромным числом форменных элементов.
Прочтите также: Боль в сердце, тошнота и кружится голова: похожие симптомы различных патологий
В качестве реагента чаще всего выступает раствор хлорида натрия концентрацией 0,9%. При необходимости альтернативой служит 5% раствор натрия цитрата. Процедуру разбавления крови выполняют в пробирке или в специальном смесителе, называемом меланжером.
Внимание! Использование растворов с более высокой или низкой концентрацией исключено, так как повлечет за собой разрушение кровяных клеток.
Разбавление крови в меланжере
Меланжером называется изготовленный из стекла градуированный капилляр длинной 10 см с расширением на конце, внутри которого расположен шарик. Последний выполняет важную функцию – равномерное смешивание раствора и крови. Цвет шарика меланжерного капилляра будет красным, если он предназначен для эритроцитов, и белым – для работы с лейкоцитами.
Методика подсчета эритроцитов позволяет проводить процедуру исследования и со стабилизированной кровью, и с нестабилизированным материалом сразу после его забора у пациента.
Кровь набирают меланжерным капилляром до деления 0,5, после чего кончик смесителя очищают от крови с помощью марли либо ватки и следующим действием набирают разбавляющий раствор до деления 101. Перекрыв пальцами отверстия капилляра, полученный образец тщательно смешивают около 3 минут. В счётную камеру помещают четвёртую каплю, предварительно удалив первые три на марлю. Таким образом получают разбавление крови в 200 раз.
Разбавление крови в пробирке
При пробирочном методе разбавления крови исследуемый материал разводят в 200 раз следующим образом: 4 мл раствора хлорида натрия помещают в пробирку, после чего добавляют 0,02 мл крови.
Для этого забор материала производят пипеткой, кончик которой протирают ваткой или другой тканью. Образец крови помещают на дно пробирки, пипетку промывают ближе к поверхности раствором хлорида натрия. Готовый образец перемешивают и оставляют до дальнейшего этапа исследования, но менее чем на 3 часа.
Методика подсчета эритроцитов
Соблюдение алгоритма позволяет произвести точный подсчет клеток
Исследуемую кровь разводят при помощи физиологического раствора минимум в 100 раз для того, чтобы стал возможен визуальный подсчет красных кровяных телец. При недостаточном разведении в камерах образуется двойной слой форменных элементов крови, что делает невозможным их определение. После наложения покровного стекла и притирки проводят микроскопирование препарата при увеличении окуляром х10. Подсчет ведется во всех 5 больших квадратах, разделенных линиями на 16 секторов. Расчет объемных значений проводят при помощи умножения полученного числа эритроцитов на степень разведения (чаще в 100 или 200 раз) и на 4000, затем проводят деление полученного числа на 80 (количество малых квадратов при подсчете). Полученное число характеризует количество эритроцитов в 1 мкл крови.
Работа № 1. Подсчет эритроцитов крови в камере Горяева.
⇐ ПредыдущаяСтр 2 из 4Следующая ⇒
Оборудование:микроскоп, счетная камера Горяева, 4 мл 3% раствора хлорида натрия, капилляр от гемометра Сали, скарификатор, вата, спирт.
Цель работы:научиться определять количество эритроцитов в крови человека, оценивать результаты.
Ход работы:
1. Покровное стекло притирают к стеклу камеры Горяева до появления ньютоновских колец.
2. В пробирку налить 4 мл 3% раствора хлорида натрия.
3. Набрать в капиллярную пробирку от гемометра Сали до метки крови (0,02 мл).
4. Осторожно выдуть кровь в пробирку с 3% раствором хлорида натрия и ополоснуть капилляр этим же раствором. Содержимое пробирки тщательно перемешать.
5. Концом круглой стеклянной палочки взять из пробирки, наклонив ее каплю крови и заполнить камеру Горяева.
6. Поместить камеру на предметный столик микроскопа под малое увеличение, найти сетку счетной камеры и перевести тубус микроскопа на большое увеличение.
7. Подсчитать количество эритроцитов в 5 больших квадратах, разделенных на 16 маленьких, которые расположены по диагонали сетки. При подсчете используют правило Егорова: “относящиеся к данному квадрату считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границах”.
8. Количество эритроцитов вычисляется по формуле:
где А – сумма эритроцитов в 80 маленьких квадратиках,
1/4000 мм3 – объем камеры Горяева над одним маленьким квадратиком,
200 – разведение крови в 3% NaCl,
80 – число маленьких квадратиков, в которых подсчитывают эритроциты.
Результаты:
Выводы:
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕМОГЛОБИНА
В КРОВИ МЕТОДОМ САЛИ
Определение количества гемоглобина в крови производится колориметрическим методом Сали. Для этого имеется специальный прибор колориметр. Определить количество исследуемого вещества в колориметре можно в тех случаях, когда имеется параллельная зависимость между концентрацией данного вещества в растворе и интенсивностью окрашивания. Простейший тип колориметра – гемометр Сали, которым обычно пользуются для определения Нb в крови. Он состоит из трех пробирок одинакового диаметра. Одна из них пустая, а в других, запаянных с обоих концов, содержится стандартный раствор солянокислого гематина, соответствующий высшему пределу нормы Нb 166,7 г/л. Все три пробирки вставлены в небольшой штатив, задняя стенка которого сделана из стекла молочного цвета. К гемометру приложена пипетка ёмкостью 0,02 мл (или 20 мм3).
Работа № 2. Определение количества гемоглобина в крови по способу Сали (гематиновый метод).
Оборудование:гемометр Сали, пипетка, скарификатор, 0,1 н раствор хлористоводородной кислоты, вата, спирт.
Цель работы:научиться определять количество гемоглобина по способу Сали и оценивать результаты.
Ход работы: в среднюю пробирку гемометра наливают 0,1 н раствор хлористоводородной кислоты до метки. Пипеткой от гемометра Сали набирают 0,02 мл крови (до метки) и выдувают на дно пробирки. Содержимое пробирки перемешивают, оставляют на 5-10 минут для превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к содержимому пробирки добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет одинаков с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой). Цифра, стоящая на уровне мениска полученного раствора, указывают на содержание гемоглобина в исследуемой крови в г%. Для перевода в г/л полученную цифру умножают на 10. В норме концентрация гемоглобина (абсолютное содержание) у мужчин – 130-160 г/л, у женщин – 120-140 г/л. Сравнить полученный результат с нормой, оценить результат.
Результаты:
Выводы:
РАСЧЕТ ИНДЕКСОВ ЭРИТРОЦИТОВ.
Цветовой показатель характеризует соотношение между количеством гемоглобина крови и числом эритроцитов. Цветовой показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином. Цветовой показатель здорового человека равен 0,85-1,05. Если цветовой показатель выше нормы – гиперхромия. Если ниже нормы – гипохромия.
Работа № 3. Вычисление индексов эритроцитов.
Цель работы:определить степень насыщенности эритроцитов гемоглобином, оценить результат.
Ход работы:
1. Цветной показатель (ЦП)или (Fi) фарб-индекс (Farb
– цвет,
index
– показатель) относительное содержание гемоглобина в эритроцитах, рассчитывается по формулам:
ЦП= __________3*Hb (г/л)___________________
3 первые цифры числа эритроцитов в млн.
В нормеЦП =0,8-1,0 (у новорожденных – 0,9-1,3; до 1 года – 0,75-0,8; после 1 года – как у взрослых).
2. Среднее содержание гемоглобина в эритроците– СГЭ (MCH, НbЕ):
Вычисление СГЭ производится по формуле:
СГЭ= содержание гемоглобина(г/л)_
число эритроцитов в л
В норме 24-36 пг (10-12г), (у взрослых – 30 пг; у новорожденных – 33,3 пг; 5-6 мес. – 26,1пг)
Результаты:
Выводы:
⇐ Предыдущая2Следующая ⇒
Рекомендуемые страницы:
